genera
Immunfixering är ett laboratorietest som möjliggör identifiering och typificering av gammaglobuliner närvarande i ett biologiskt prov.
I detalj tillåter analysen att studera - i patientens blod eller urin - immunoglobulinklasserna (IgA, IgG, IgM, IgE eller IgD) och typen av lätta kedja kappa eller lambda, enligt deras specifika elektroforetiska rörlighet . För att identifiera vilket gammaglobulin som är involverat involverar följaktligen immunfixeringen inokuleringen av specifika antigener för fragmentet eller motsvarande antikropp ( antiimmunoglobulinantisera ): närvaron av den misstänkta förändringen bekräftas av bildningen av en fällning, synlig för blotta ögat eller mikroskop.
Denna information är av stor betydelse för att särskilt fastställa diagnosen av plasmacellpatologier (gammopatier eller plasmacelldyscrasier). Immunfixering är mycket användbar för utvärdering och övervakning av multipel myelom, Waldenströms makroglobulinemi och primär amyloidos (även kallad lättkedjig amyloidos).
vad
Immunfixering (eller immunoelektrofores, förkortad i akronym IFE ) är en teknik som kan bestämma om och vilken klass av immunoglobuliner (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) eller typen av lätta kedja kappa eller lambda, är närvarande i överskott eller defekt i patientens blodserum och urin.
Kappa- och lambda-ljuskedjorna karakteriserar den monoklonala komponenten, dvs antikropparna med samma identiska kemiska struktur.
Serum- och urinimmunförstärkning: när anges det?
Plasmacellulära dysplasier eller gammopatier är en heterogen grupp av sjukdomar med okänd etiologi som kännetecknas av:
- Disproportionell proliferation av en B-cellklon ;
- Närvaro i serum och / eller urin av en typ av immunoglobulin (eller dess polypeptidunderenhet), strukturellt och elektroforetiskt homogen ( monoklonal ).
Normalt diagnostiseras plasmacelldyscrasier med elektrofores av serum- och urinproteiner, följt av serumimmunfixering (IFE).
Samtidigt kan ett blodprov förskrivas för att mäta den totala koncentrationen av immunglobuliner (IgG + IgM + IgA).
Att lära sig mer: Immunoglobuliner - vad de är, hur de mäts och referensvärden »Immunfixering: grundprincip
Immunfixering är en undersökning som involverar två faser (först elektroforesen i agarosgel, då immunutfällningen med specifik antisera ).
Det första steget med immunfixering är samma som för ELECTROPHORESIS av proteiner (eller protidogramma), därför är det nödvändigt att komma ihåg något begrepp:
- Elektrofores är en laboratorieanalys som gör det möjligt att bestämma mängden proteiner som finns i blodserumet eller i andra biologiska prover och för varje fraktion avslöjar om det finns några kvalitetsmässiga avvikelser. I synnerhet tillåter denna provning separering av proteiner i fem grupper: albumin, alfa 1-globulin, alfa 2-globulin, beta-globulin och gammaglobulin ; De senare undersöks mer specifikt med immunfixering.
- Elektrofores är en separationsmetod baserad på den olika migrationshastigheten hos elektriskt laddade partiklar genom en lösning och ett inert bärmedium under påverkan av ett elektriskt fält, alstrat av en likström. I praktiken utnyttjar provningen den elektriska laddningen och molekylmassan hos de proteiner som finns i patientens prov. Under impulsen av ett elektriskt fält migrerar dessa makromolekyler och "grupperar" efter typ, som svarar på stress på ett karakteristiskt sätt. Resultatet ( elektroforetisk spårning ) består av olika toppar och kurvor, till vilka proteinfraktionerna motsvarar. Normalt är den första toppen, högre och smalare, den för albumin ; att följa, vi observerar globulin toppar, mycket lägre än albumin. Ökningen eller minskningen av amplituden och intensiteten hos topparna som bildar sig i vägen indikerar en större eller mindre närvaro av proteiner i varje kategori; ju fler proteiner är närvarande i ett band, ju högre respektive topp. När det gäller gamma globuliner, om man vill veta kvantiteten av var och en av de olika klasserna (IgA, IgM, IgG etc.) kommer det att vara nödvändigt att tillgripa enstaka doser. I allmänhet finns mer gamma globuliner närvarande i ett band, ju högre respektive topp är; höjden motsvarar den totala mängden proteiner som tillhör en viss kategori.
IMMUNOFISSATION tillhandahåller:
1) Agarosgelelektrofores : patientens prov (serum eller urin) deponeras på en elektroforetisk remsa, dvs stöd för migration (vanligtvis agarosgel). Genom applicering av ett elektriskt fält, alstrat av en likström, erhålles separering i olika band. I praktiken migrerar varje typ av gammaglobulin närvarande i blandningen (dvs. i patientprovet) baserat på molekylmassan och den elektriska laddningen. Den olika elektroforetiska rörligheten hos gammaglobuliner gör det möjligt att identifiera dem (var och en sammanfaller med ett specifikt band i den elektroforetiska vägen) och att observera eventuella anomalier.
2) Immunutfällning med specifik antisera (fixering) : specifika antigener för en specifik antikropp eller ett fragment tillsättes individuellt till varje elektroforetisk remsa (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa eller anti-kedja) lambda ljuskedja). Om ett monoklonalt protein är närvarande, kommer interaktionen av antigenet med motsvarande antikropp att producera ett smalt band (det vill säga att resultatet är positivt) och bildandet av en fällning, synlig för blotta ögat eller mikroskop. Slutligen bearbetas provet (dvs tvättat och färgat) för att avlägsna proteiner som inte har utfällt, för att erhålla torkningen av gelén och fortsätta med läsningen av resultaten.
Varför det går
Vad är Immunofixation för?
Serumimmunfixering är en undersökning som indikeras för att diagnostisera eller övervaka sjukdomar som kännetecknas av en förändring av gammaglobuliner, speciellt när det gäller framställning av monoklonal komponent ( monoklonal gammopati ).
För att lära sig mer: Monoklonala Gammopatier - Vad och vilka är »Immunfixering är användbar i fall av misstänkt plasmacelldyscrasi och är grundläggande för studier av MIELOMA (och relaterade patologier) och MGUS (en akronym för "monoklonala gammopatier med osäker betydelse").
Detta test tillåter oss också att utvärdera Waldenströms makroglobulinemi och lättkedjig amyloidos ( AL ).
Immunofixation: När är provningen föreskriven?
Indikationen för immunfixering följer efter klinisk eller laboratoriebevis som väcker misstanke om förändringar av monoklonala antikroppar eller immunoglobuliner i serum eller urin.
Till exempel tillåter denna undersökning att fördjupa resultatet av seroprotektiv eller urinelektrofores: när i elektroforetisk spårning avviker de band som motsvarar gammaglobulinerna från normalitet, identifierar immunfixeringen vilken av dessa proteiner som förändras i kvantitet och kvalitet.
Sammanfattningsvis kan immunimmixering av serum förskrivas:
- I det fall då andra laboratorietester ger ett onormalt resultat, när det gäller frånvaro eller mindre och större mängd plasmaproteiner i förhållande till normen;
- När närvaron av sjukdomar som kännetecknas av produktionen av en monoklonal komponent misstänks, såsom:
- Multipel myelom och dess varianter;
- Waldenströms makroglobulinemi;
- amyloidos;
- När patienten utvecklar symtom och tecken som föreslår närvaron av en monoklonal gammopati eller multipel myelom, såsom:
- Benmärtor;
- anemi;
- Lätt trötthet;
- Återkommande infektioner;
- Oförklarliga frakturer.
I fallet med multipelt myelom är elektroforesen av proteiner och immunfixering av stor användbarhet även för att övervaka sjukdomsframsteg (uppföljning).
Immunfixering: på vilka prov kan man utföra?
De biologiska prover som kan utsättas för immunfixering är huvudsakligen:
- Serum (serumimmunfiksering);
- Urin (immuninfixering i urinen);
- Sprit * (vätskeimmunfixering).
* Obs! CSF eller cerebrospinalvätska är vätskan som permeates och skyddar hjärnan, ryggmärgen, kranialnerven och ryggrad.
Normala värden
Ett negativt resultat av serum- och urinimmunfixering för monoklonala eller polyklonala gammaglobuliner anses NORMAL .
Gamma globuliner
Gamma globuliner utgör 9-20% av de totala plasmaproteinerna.
- Referensvärde Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Beträffande den totala koncentrationen av immunoglobuliner ( IgG + IgM + IgA ) antas att värden mellan 600 och 2300 mg / dl är normala.
- Referensvärde Immunogobuliner i serum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Obs : Examens referensintervall kan variera något beroende på ålder, kön och instrumentation som används i analyslaboratoriet. Av den anledningen är det att föredra att konsultera de områden som anges direkt på rapporten. Man bör också komma ihåg att resultaten av analyserna måste bedömas som helhet av allmänläkaren, som känner till patientens medicinska historia.
Höga värden - orsaker
Ökningen i gammaglobuliner kan vara:
- Polyklonal, om produktionen av immunglobuliner är heterogen, det vill säga, alla komponenter i gammaglobulinerna - som produceras eller härrör från olika plasmaceller - påverkas av ökningen;
- Monoklonal, när gamma-globulinerna produceras eller härrör från en enda typ (klon) av plasmaceller.
Ökningen i polyklonala gammaglobuliner kan vara associerad med:
- Kroniska inflammatoriska sjukdomar;
- Reumatoid artrit
- Systemisk lupus erythematosus;
- Kroniska leversjukdomar (som hepatit och cirros);
- Akuta och kroniska infektioner;
- Nya immuniseringar;
- Vissa tumörsjukdomar.
Höga värden av monoklonala gammaglobuliner kan i stället indikera närvaron av:
- Några neoplasmer och kroniska inflammationer;
- Multipelt myelom;
- lymfom;
- Waldenströms makroglobulinemi.
Ett överskott av gammaglobulin kallas hypergammaglobulinemi, medan en brist är känd som hypogammaglobulinemi .
Låga värden - orsaker
Reduktionen av gammaglobuliner kan indikera närvaron av olika sjukdomar i immunsystemet på genetisk basis, inklusive agammaglobulinemi eller en sekundär immunbrist (t.ex. AIDS, njursvikt, akut sepsis och Cushings syndrom).
Minskningen av gammaglobulinvärden kan också bero på användningen av cytostatika, immunosuppressiva medel och steroider.
Hur det görs
Serumimmunfixering
Serumimmunfixering innebär en enkel bloddragning från en arnas ven. Serumet erhålles genom centrifugering av det biologiska provet; Detta gör det möjligt att separera fraktionen som innehåller cellerna (korpuskulär del) från blodets flytande (plasma). Blodserumet är fritt från koagulationsfaktorer (fibrinogen, faktor VIII, faktor V och protrombin).
Urin-immunförstärkning
För att utföra immuninfixering i urinen är det nödvändigt att samla en liten mängd urin i en speciell steril behållare. Baserat på indikationer på läkare och laboratorium kan provet samlas in utan en exakt timing ( slumpmässig ) eller inom 24 timmar .
Immunkonfixering av spritdrycker
Analysen kräver att en liten mängd cerebrospinalvätska tas genom insättning av en nål, inuti ryggradshålan ( ländryggspunktur ).
beredning
Immunofixation: hur förbereder du dig för tentamen?
- Före blodprovtagning kan vissa laboratorier kräva att du observerar en snabb på minst 10-12 timmar. Under denna tid tillåts en liten mängd vatten.
- Immunfixering kan utföras på urin som samlats in vid en viss tid på dagen (slumpmässigt) eller under 24 timmar, så det är nödvändigt att på lämpligt sätt erhålla lämpliga sterila behållare.
- Vad gäller immunförening av vätskan är i stället ingen speciell beredning nödvändig.
Vad kan ändra resultatet av tentamen?
Vissa läkemedel kan påverka resultatet av immunfixering, så det är lämpligt att rapportera eventuella pågående läkemedelsbehandlingar till läkaren.
Under sex månader före undersökningen kan administrering av vacciner (immunisering) och användning av läkemedel, såsom fenytoin, prokainamid, orala preventivmedel, metadon och terapeutiskt gammaglobulin, öka koncentrationen av immunglobuliner. Andra läkemedel som kan förändra testresultatet är kortikosteroider, neomycin, acetylsalicylsyra och klorpromazin.
Tolkning av resultat
Resultatet av immunfixeringen utvärderas i kombination med resultatet av andra analyser. Tolkningen av upptäckten är ansvarig för allmänläkaren eller referensspecialisten som kan identifiera och jämföra de förändringar som påverkar ett specifikt gammaglobulin (till exempel bandet som sammanfaller med immunoglobulinerna G) mot vissa sjukdomar. Denna utvärdering bekräftar eller stöder den diagnostiska hypotesen: I allmänhet kan immunfixering avslöja en normal gammaglobulinprofil eller identifiera ett monoklonalt protein eller en polyklonal modell .
När sjukdomen är definierad kan immunfixering utföras för:
- Övervaka sjukdomen över tiden, följ sedan kursen (uppföljning);
- Kontrollera effektiviteten av det terapeutiska protokollet .
Fördelar och nackdelar med immunförstärkning
Jämfört med proteinelektrofores, immunfixering:
- Det är snabbare : resultaten av immuniseringen erhålls vanligtvis inom tre timmar;
- Det är mer känsligt (om än något): Immunfixering kan avslöja ett immunoglobulin som är uteslutet från proteinelektrofores, särskilt vid låga koncentrationer (mindre än 1 gram / liter).
Vidare är immunfixeringen:
- Det kan delvis vara automatiserat ;
- Det är lättläst och tolkbart .
Immunfixering är dock dyrare än proteinelektrofores och tillåter endast gammaglobulinanalys .
Normalt resultat
Vid immunfixering innefattar en normal bana:
- Ett band som sammanfaller med det mörkare immunoglobulinet G ( IgG );
- Ett band som motsvarar det lättaste immunoglobulinet A ( IgA );
- Frånvaron av bandet för immunoglobulin M ( IgM );
- Kappabandet är tätare än det för lambda (lättkedja), med ett förhållande av 2: 1.
I ett normalt resultat är banden stora och det finns en gradvis och likformig minskning av färgdensiteten mot kanterna av immunelektroforesremsan.
Polyklonala gammaglobuliner
I vissa fall döljs alla immunförbindningsband jämnt i samma utsträckning. Denna modell representerar närvaron av polyklonala immunoglobuliner . Även i detta fall är banden breda och övergången till kanterna hos den immunoelektroforetiska remsan är gradvis. IgM-bandet - normalt frånvarande - är brett.
Monoklonala gamma globiner
När ett smalt band med skarpa kanter kan identifieras i immunförbindelsens rutt betyder det att sökandet efter monoklonala komponenter är positivt .
Identifikationen av ett monoklonalt immunoglobulin är användbart vid diagnos av följande tillstånd:
- Monoklonal gammopati av obestämd betydelse (MGUS);
- Multipelt myelom;
- Waldenstroms makroglobulinemi;
- Amyloidos.
Vidare kan immunfixering användas för övervakning av terapi i plasmacelldyscrasier (dvs multipel myelom och Waldenstroms makroglobulinemi). Om nivån av monoklonalt protein minskar eller inte kan detekteras efter kemoterapi kan det indikera ett svar på behandlingen . Däremot är ett monoklonalt protein som kvarstår trots behandling ett tecken på eldfasta sjukdomar .
Vänligen notera . Ett negativt immunfixeringsresultat utesluter inte alltid en plasmacelldyscrasi. Till exempel kan ett icke-sekretoriskt multipelt myelom eller oligosekretoriskt ge negativa resultat både i urin och i serum. Om den diagnostiska misstanken för gammopati fortfarande är hög, anges bestämningen av förhållandet mellan Kappa / Lambda Libere Light Kedjorna ( K / L-förhållandet ).
Immunfixering och diagnos av multipel skleros
Immunfixeringen av cerebrospinalvätska (vätska) ordineras när läkaren misstänker förekomsten av multipel skleros . I det här fallet är den väg som bestäms karaktäristisk, eftersom den framhäver närvaron av de så kallade oligoklonala banden . Resultatet rapporteras i laboratorierapporten som positivt . Det bör anses att banden normalt inte observeras vid immunimmixering i serum, eftersom de korrelerar till produktionen av intratekala gammaglobuliner .
Det bör dock noteras att detta resultat inte nödvändigtvis bekräftar diagnosen, eftersom andra tillstånd kan uppstå med oligoklonala band i cerebrospinalvätskan.
Med andra ord är identifieringen av oligoklonala band med vätskeimmunfiksering väldigt användbar för att stödja diagnosen multipelskleros, men måste bekräftas av andra undersökningar . Andra tillstånd som kan ge detta resultat är inflammationer i centrala nervsystemet, inklusive: HIV-relaterad encefalit, neurosyphilis, neurosarcoidos, Lyme meningoencefalit, CNS-maligniteter, optisk neuromyelit och transversell myelit.
