Essay ABTS
Det är en analysmetod som använder en spektrofotometrisk mätning för att bestämma antioxidantkapaciteten hos ett prov. Vid användning av en UV-Vis-spektrofotometer mäts absorbansen hos en lösning innehållande radikal ABTS • +, genererad genom oxidation av ABST (2, 2'-azinobis (3-etylbensotiazolin-6-sulfonat), en färglös substans i formen radikaler färgas genom att absorbera vid våglängdsegenskaper i det synliga området. Tillägget till lösningen av ABTS • + av antioxidantmolekyler, som kan verka genom att överföra både väte och en elektron, bestämmer reduktionen av radikalen i den färglösa formen, med efterföljande missfärgning av reaktionsblandningen. Denna blekning, proportionell mot mängden närvarande antioxidant, kan mätas som en minskning av absorbansen över en viss tid vid en specifik våglängd (734 nm). Antioxidantkraften uttrycks genom jämförelse med absorbansvärdena uppmätta för kända mängder av en antioxidantmolekyl vald som referensstandard, vilken vanligtvis är askorbinsyra eller Trolox (i detta fall vi talar om TEAC Trolox ekvivalent antioxidantkapacitet antioxidant aktivitet.
Antioxidantens effektmätning baserad på användningen av ABTS har fördelen av att vara enkel och snabb. Dessutom tillåter mätningen av antioxidantämnen både hydrofila och lipofila inom ett brett pH-område. Man måste emellertid komma ihåg att den radikala som används (ABTS • +) inte är fysiologisk och inte är närvarande i biologiska system och att problem med repeterbarhet av mätning på grund av reaktionskinetiken hos de olika antioxidanterna som är inblandade, ofta framhävs.
FRAP (Ferric Reduce Antioxidant Power)
FRAP-testet mäter antioxidanternas reducerande förmåga mot järnjoner. Det är en metod som bygger på elektronöverföring, där järnjoner passerar från Fe3 + till Fe2 +. Under vissa förhållanden av pH (3.6) och i närvaro av TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazin) bildar dessa joner komplex med olika egenskaper, i synnerhet det reducerade derivatet (Fe2 + -TPTZ) antar en blå färg som har en maximal absorption vid 593 nm vilket kan mätas spektrofotometriskt. Reduktionskapaciteten hos en antioxidant substans kan därför mätas som en förändring i absorbansen hos lösningen innehållande oxidanten vid våglängden fastställd genom jämförelse med variationen i förhållande till en standard (t.ex. askorbinsyra).
FRAP-testet var konstruerat för att mäta plasmaets reducerande kraft, men anpassades sedan för att testa antioxidantkapaciteten hos rena föreningar och komplexa matriser. Eftersom denna metod tillåter att endast utvärdera reduktionskapaciteten genom elektronöverföring, fullständigt ignorera verkan av antioxidanter som verkar genom väteöverföring, tillåter det faktiskt inte att mäta molekylers bidrag, såsom tioler och proteiner, vilka spelar en antioxidantroll grundläggande i biologiska vätskor (t.ex. blod). Fördelen med att använda denna metod är att den är en av de enklaste, snabbaste och minst dyra metoderna för att bestämma antioxidantkapaciteten in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenyl-l-picrilhydrazyl (DPPH •) är en mycket stabil och kommersiellt tillgänglig kväveradikal, kännetecknad av en intensiv lila-röd färg som slöser när den reduceras i närvaro av en molekyl med antioxidantkapacitet. Genom spektrofotometrisk mätning vid 517 nm av förändringen i absorbansen av DPPH-lösningen efter reaktion med en antioxidantförening är det möjligt att kvantifiera teststoffets reducerande kapacitet huruvida den verkar med väteöverföring eller elektronöverföring. Resultatet uttrycks i allmänhet som IC50, dvs mängden antioxidant som kan reducera den initiala DPPH-koncentrationen med 50%.
Detta är en snabb, enkel och billig metod. Gränserna för denna analytiska teknik ges av möjligheten att resultaten av analysen snedvrids i det fall då de molekyler som undersöks absorberar i samma våglängdsintervall för DPPH-radikalen eller i närvaro av stora molekyler sterkt inblandade som inte de kommer att reagera med den reaktiva delen av radikalen. Detta får DPPH att reagera med antioxidanter upp till 1000 gånger långsammare än peroxylradikaler.
PCL TEST (Photochemiluminescence)
PCL-testet är baserat på reaktionen av en specifik radikalart, superoxidanjonen (O2 • -), genererad fotokemiskt genom UV-strålning, med en förening som kan emittera kemiluminescens. Markören som används är luminol, en molekyl som vid oxidering av fria radikaler avger ett ljus som kan mätas med hjälp av ett specialinstrument (Photochem®). Förekomsten av antioxidant substanser i rantionsblandningen inaktiverar radikala arter som hämmar utsläpp av kemiluminescens. PCL-analys är mycket snabb och känslig. Vidare kan användningen av två olika analytiska protokoll, kallade ACW (Vattenlöslig Antioxidantkapacitet Vattenlöslig) och ACL (Antioxidantkapacitet Lipidlöslig), bidra till den totala antioxidantkapaciteten hos den vattenlösliga komponenten (flavonoider, vitamin E) för samma förening. C, aminosyror, etc.) än den liposoluble (tokoferoler, tocotrienoler, karotenoider etc.). Antioxidantkapaciteten hos produkten som undersöks erhålls genom att jämföra de värden som registrerats med mätningarna avseende standardreferensmolekyler, askorbinsyra för ACL-protokollet och Trolox för ACW-protokollet.
